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1、GC2MS法建立温莪术挥发油指纹图谱研究周 欣1 ,23,李章万1,王道平2,梁光义2,彭炳先2(1.四川大学 华西药学院,四川 成都610041 ;2.贵州省中国科学院 天然产物化学重点实验室,贵州 贵阳550002)摘要 目的:建立温莪术挥发油的指纹图谱测定分析方法,为温莪术药材的质量控制提供参考,同时也为温莪术中药制剂制定指纹图谱奠定基础。方法:采用水蒸气蒸馏法提取温莪术挥发油,用GC2MS联用技术对其进行指纹图谱测定,并采用国家药品监督管理局推荐的中药指纹图谱计算软件进行计算,建立温莪术挥发油的共有指纹图谱。结果与结论:建立的GC2MS研究温莪术挥发油指纹图谱的方法有较好的重现性、 精
2、密度和稳定性(RSD均小于5 %) ,再加上GC2MS具有多成分同时定性的优势,所建立的温莪术挥发油的GC2MS指纹图谱为其质量控制打下基础。关键词 温莪术;挥发油;GC2MS;指纹图谱中图分类号 R 284.1文献标识码 A文章编号 100125302(2004)1221138204收稿日期2004208209基金项目 贵州省 “十五” 攻关项目(200121115)通讯作者3周欣,Tel : (0851) 3806327 , E2mail :alice9800 莪术是姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulisValeton、 广西莪术C1kwangsinensisS. G. Le
3、e et C. F.Liang和温莪术C1wenyujinY. H. Chen et C.Ling的干燥根茎。中医理论认为莪术辛、 苦、 温,归肝、 脾经,具行气破血,消积止痛的功效。莪术挥发油中的 2榄香烯对肿瘤细胞生长有直接抑制作用1,莪术油能抑制肿瘤细胞异常增殖2。莪术油葡萄糖注射液是 中国药典1995年版二部新收载的抗病毒药,临床上常与抗菌药合用。王新生等3报道莪术油葡萄糖注射液治疗病毒性肺炎,以病毒唑为对照,结果表明两组在退热时间,喘憋、 咳嗽消失均有明显差异,莪术油治疗组明显优于病毒唑组。莪术油的质量直接关系到其制剂的质量。中药产业现代化的瓶颈是质量不可控、 安全不可靠4。为加强中
4、药生产的质量管理和临床用药的安全,国家药品监督管理局在中药质量标准中引入指纹图谱技术要求。色谱技术测定指纹图谱具有综合、 宏观、“模糊” 的非线性特点。本实验按照 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)和 中药注射剂色谱指纹图谱试验研究操作规程指南(试行)的规定,采用水蒸气蒸馏法提取莪术挥发油,首次采用GC2MS联用技术测定其指纹图谱,并用国家药品监督管理局推荐的中药指纹图谱计算软件(中南大学设计)进行计算,建立温莪术挥发油的共有指纹图谱。1 仪器及分析条件HP6890 - HP5973 GC2MS联用仪(美国惠普公司)。色谱柱为HP - 5MS (0. 25 mm30 m ,0. 25m)
5、弹性石英毛细管柱。冰片、 莪术醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号为74328902 ,018529703)。醋酸乙酯(分析纯,上海化学试剂有限公司)。柱温60,以10 min- 1升温至100,再以4 min- 1升温至200 后,以20 min- 1升温至280,保持2 min;汽化室温度250;载气为高纯氦(纯度为991999 %) ;柱前压5216 kPa ,载气流量1.0 mLmin- 1;进样量1L ;分流比401。离子源为EI源;离子源温度230;四极杆温度150;电子能量70 eV;发射电流3416A;接口温度280;溶剂延迟4 min;质量范围10550 amu。2 样品及
6、挥发油的提取2.1 实验材料 购得温莪术(浙江瑞安产) 10个,由本实验室的严志坚博士鉴定。2.2 挥发油的提取 取莪术干燥根茎,粉碎成粗粉,过0.64 mm筛,称量80 g ,加入1 000 mL烧瓶中,加8倍水量,用挥发油提取器提取6 h(提取条件经正交实验优化) ,获得具有特殊气味的油状物,用无水硫酸钠除去水分放置于冰箱( - 18)中备用。3 结果与讨论3. 1 精密度 取同一号样品,在所建立的测定条件8311第29卷第12期2004年12月 中 国 中 药 杂 志China Journal of Chinese Materia MedicaVol129 ,Issue12Decembe
7、r ,2004 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.下,连续进样5次,实验结果得出TIC图中各色谱峰相对保留值的RSD 0. 24 %;色谱峰面积的RSD 4.57 % ,表明精密度好。3. 2 重复性 取同一号样品5份,按样品制备法进行制备,在所建立的测定条件下测定,实验结果得出TIC图中各色谱峰相对保留值的RSD 0.29 %;色谱峰面积的RSD 4.21 % ,表明方法的重现性良好。3. 3 稳定性 取同一号样品,在所建立的测定条件下,分别在0 ,1 ,2 ,4 ,8 ,12 ,24
8、 h进行测定,考察各主要色谱峰相对保留值,结果表明各主要色谱峰相对保留值较稳定,RSD 4. 33 %。样品在冰箱中- 18 保存6个月后按所建立的测定条件测定,谱图保持不变,表明样品的稳定性好。3. 4 指纹图谱的建立及分析 以浙江瑞安产的温莪术为研究对象,对其10批次药材的挥发性成分进行测定,10个批次温莪术油的GC2MS的TIC见图1。有21个主要的共有特征峰(占总峰面积94 %以上) ,选择8号峰为参照峰,然后分别求出各特征峰的调整保留时间之比(值)和相对峰面积(峰面积之比) ,结果见表1。图1 浙江瑞安10个批次的温莪术油的GC2MS的TIC图(从上至下是110号样品) 由于采用的测
9、试手段是GC2MS联用技术,通过HP MSD化学工作站检索Nist98标准质谱图库和WILEY质谱图库,并结合有关文献谱图解析528,鉴定了20个共有峰;同时还采用冰片和莪术醇的对照品进行对照。从温莪术挥发油的质谱分析结果可知,值为1. 00时,组分是 2榄香烯( 2elemene) ,该成分是莪术油中具有抗肿瘤作用的活性成分1。单峰面积占总峰面积大于20 %的共有峰只有1个,就是值为1. 15的组分,质谱检索结果是莪术烯(curzerene) ;单峰面积占总峰面积大于10 %的共有表110批次温莪术油特征(峰)成分相对含量峰号化合物值样品相对峰面积123456789101 2蒎烯0.310.
10、070.080.070.060.080.060.070.060.070.082莰烯0.330.130.150.130.090.150.100.140.100.120.1431 ,82桉叶油素0.451.331.621.610.591.481.121.341.101.251.504芳樟醇0.550.230.260.240.090.230.180.220.180.200.245樟脑0.620.400.460.470.200.410.350.400.340.360.456异龙脑0.640.180.200.210.110.180.160.190.160.170.217 2榄香烯0.920.150.12
11、0.110.160.130.140.140.130.130.128 2榄香烯1.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.009 2石竹烯1.040.130.130.150.150.140.150.140.140.140.1310 2榄香烯1.060.120.120.140.130.120.140.110.140.140.1211 2 草烯1.090.110.110.110.100.110.120.100.120.110.1012吉马烯D1.120.300.170.220.290.240.240.280.240.220.2213莪术烯1.154.844.1
12、54.744.784.614.504.654.464.694.6114吉马烯B1.230.400.350.400.470.360.420.380.410.390.4215 2榄香酮1.290.240.400.320.280.320.350.230.390.440.2916莪术醇1.310.120.150.110.100.741.060.171.160.570.6217呋喃二烯1.400.370.410.410.570.300.490.390.510.380.4718吉马酮1.411.581.721.981.841.631.821.731.831.621.9319新莪术二酮1.433.473.7
13、34.343.533.483.823.673.773.433.6520莪术二酮1.470.330.600.710.570.510.620.490.200.530.5221未知物11.570.230.440.460.380.340.430.310.620.370.37峰有2个,一个是值为1. 41时的组分,是吉马酮,另一个是值为1. 43时的组分,是新莪术二酮(neocurdione) ;在10批次的温莪术挥发油中,这3个共有峰的峰面积比值是在 中药注射剂指纹图谱研9311第29卷第12期2004年12月 中 国 中 药 杂 志China Journal of Chinese Materia M
14、edicaVol129 ,Issue12December ,2004 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.究的技术要求(暂行)允许的误差范围内。 值为1.31时组分是莪术醇(curcumol) ,该组分相对峰面积变化较大,但该组分是单峰面积占总峰面积小于10 %的共有峰,在 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)中,单峰面积占总峰面积小于10 %的共有峰,峰面积比值不作要求。3.5 指纹图谱相似度分析 指纹图谱的评价指标是供试品指纹图谱与该品种对照用指纹图谱(共有模式)及供试品之间指纹图
15、谱的相似性。采用国家药品监督管理局推荐的 “中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件” 对测定结果进行计算,得到温莪术(浙江瑞安产)挥发性成分的共有指纹图谱,见图2。对照共有指纹图谱,10个批次温莪术油的相似性分析结果见表2。表210个批次温莪术油的相似性分析结果样品编号相关系数中位数均值相合系数中位数均值10.922 00.919 50.926 70.924 620.989 40.979 70.990 00.980 830.984 30.981 30.984 90.981 840.985 10.975 40.986 00.977 050.942 70.969 50.946 10.971 360.
16、974 00.965 80.975 50.968 070.932 10.962 60.936 20.965 080.990 60.992 60.991 20.992 990.989 30.982 70.989 70.983 8100.986 70.989 30.987 50.989 9图210个批次莪术油中的GC2MS共有指纹图谱 从此结果可以看出,10批次温莪术挥发油样本的相似度均在90 %以上,未发现离群样本,符合国家药品监督管理局对中药指纹图谱相似度的要求。3. 6 小结本研究在提取、 测试条件等方面经过大量的实验摸索,所建立的GC2MS研究温莪术挥发油指纹图谱的方法有良好的精密度、 重
17、现性,样品稳定。为了保证中药制剂的质量,一定要固定其药材的产地和种类。在建立莪术药材指纹图谱时,应针对不同产地、 不同种的药材分别建立其指纹图谱。GC2MS具有定性功能的优点,因而采用GC2MS建立挥发油指纹图谱,基本不受色谱柱、 不同仪器等条件的限制。即使未鉴定出某些成分,也可根据其质谱 “棒形图” 进行辨认。本研究按照 中药注射剂色谱指纹图谱试验研究操作规程指南(试行)的规定,采用国家药品监督管理局推荐的 “中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件” 进行计算,使所得到的指纹图谱能全面、 综合和准确地反映温莪术药材的质量情况,为莪术药材的质量控制提供科学依据,同时也为莪术中药制剂制定指纹图谱奠
18、定基础。参考文献1 杨 骅,王仙平,郁琳琳,等.榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞凋亡.中华肿瘤杂志,1995 ,18(3) :169.2 吴万垠,罗云坚,程剑华,等.莪术油对小鼠肝癌细胞DNA作用的图像分析.中西医结合肝病杂志,1999 ,9(1) :18.3 王新生,王成芬,王利燕.莪术油葡萄糖注射液治疗病毒性肺炎的疗效观察.中医药研究,2000 ,16(3) :16.4 谢培山.中药色谱指纹图谱鉴别的概念、 属性、 技术与应用.中国中药杂志,2001 ,26(10) :653.5 周 欣,梁光义,沈万雁,等.不同产地莪术挥发油的研究.华西药学杂志,2002 ,17(3) :201.6ADAMS
19、 R P. Identification of essential oils components by cas chro2matography2mass spectrometry.Illinois: Allured Publishing Co. ,1995. 12 ,14 ,15 ,18 ,21.7 赵树年,陈于澍,谢金伦,等.萜类化合物大全.昆明:云南科技出版社,1999.705 ,784 ,1248.8 林启寿.中草药成分化学.北京:科学出版社,1977. 512 ,579 ,580.Study on fingerprint of volatile oil ofCurcuma wenyu
20、jinby GC2MSZHOU Xin1 ,23, LI Zhang2wan1, WANGDao2ping2, LIANG Guang2yi2, PENGBing2xian2(1. West China School of Pharmacy of Sichuan University , Chengdu610041, China;2.The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences , Guiyang550002, China) Abs
21、tractObjective : T o establish the method of fingerprint analysis on volatile oil ofCurcuma wenyujinby GC2MS. Method : Theessential oil were obtained by steam distillation , and the chromatographic fingerprint were determined by GC2MS. Mutual fingerprint of ten0411第29卷第12期2004年12月 中 国 中 药 杂 志China J
22、ournal of Chinese Materia MedicaVol129 ,Issue12December ,2004 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.samples of the essential oil ofCurcuma wenyujinwas established by the alike calculation software of Chinese herbal fingerprint designed by Re2search Center of Moderniz
23、ation of Chinese Herbal Medicines of Central South University. Result and Conclusion : RSD of precision and re2peatability and stability is less than 5 %. Compared with Mutual fingerprint of the essential oil ofCurcuma wenyujin, the correlation coefficientof ten samplesof the essential oil ofCurcuma
24、 wenyujinis all above 0.9 % , without abnormal sample. The method is reliable , accurate and canbe used for quality control of essential oil ofCurcuma wenyujin. Key wordscurcuma wenyujin; essential oils; GC2MS; fingerprint责任编辑 刘 收稿日期2003207205基金项目 广州市科技局2001年重点项目资助(010448159)通讯作者3杨得坡, Tel : (020) 84
25、113967 , E2mail : ls39 zsu1edu1cn不同粒径血竭粉末与制剂滴丸止血作用比较研究胡海燕1,黎 颖1,杨得坡13,王冬梅1,朱小南2,陈汝筑2,何振辉3(11 中山大学 药学院,广东 广州510080 ;21 中山大学 中山医学院,广东 广州510080 ;31 中山大学 纳米技术研究中心,广东 广州510275)摘要 目的:比较血竭滴丸、 不同粒径血竭粉末的止血作用,即考察增加比表面积或(和)增加亲水性对血竭药理作用的影响。方法:采用小鼠血浆复钙时间试验、 小鼠凝血时间试验、 小鼠断尾出血时间试验。结果:各血竭药物组与空白组比较差异均有统计学意义(P 0101 ,P
26、 0105) ,血竭超微粉 组和滴丸组与粗粉组比较差异均有统计学意义(P 0105 ,P 0101)。结论:将血竭制成超微粉及制成滴丸可以显著增强血竭的止血作用。关键词 血竭;超微粉;滴丸;止血作用中图分类号 R 28515文献标识码 A文章编号 100125302(2004)1221141203 血竭Sanguis draconis(Lour1) S1C1Chen是传统的名贵中药,具有活血止血、 抗菌消炎止痛等作用124,用于冠心病、 创伤局部的出血瘀血、 妇科宫血、 上消化道出血、 痔疮与鼻衄等出血性疾病,有良好的临床疗效5。血竭根据来源不同可分为进口血竭和国产血竭6。以前我国药用血竭主要
27、依赖进口,价格昂贵。之后在我国云南、 广西和海南三省发现并开始种植6,但产量有限,资源仍相对缺乏。血竭属难溶性药物,在水中不溶,在低浓度的乙醇中略溶。这类药物口服后在消化道内由于溶解不完全而使吸收非常有限,这对血竭资源的利用是十分不利的。作者以国产血竭(龙血竭)为研究对象,采用超微粉技术制备了血竭超微粉,旨在增大血竭比表面积以达到提高溶出的目的;利用固体分散技术联合超微粉技术制备了血竭滴丸,旨在进一步提高血竭的比表面积并同时改善其亲水性。本研究比较了血竭粗粉、 血竭超微粉以及血竭滴丸的止血作用,其结果可为血竭制剂研究和血竭资源的合理利用的提供理论依据。1 材料111 动物NIH小鼠,(202)
28、 g ,雌雄各半,由广东省医学实验动物中心提供。112 药物血竭:思药牌,中国云南省思茅制药厂,植物来源为百合科龙血树属剑叶龙血树D1Cochinchinen2sis。血竭粗粉:思药牌血竭粉碎收集80100目粉末。血竭超微粉 :血竭粗粉经超微粉碎得到,平均粒径(11430122)m ,SEM图见图1。血竭超微粉:血竭超微粉 继续粉碎得到,平均粒径(11200124)m ,SEM图见图2。血竭滴丸:自制,组成为基质2血竭超微粉 (81) ,直径约3 mm。安络血:江1411第29卷第12期2004年12月 中 国 中 药 杂 志China Journal of Chinese Materia MedicaVol129 ,Issue12December ,2004 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
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